啤酒花矮化类病毒病的理化性质是什么?
类病毒名称:啤酒花矮化类病毒Hopstuntviroid(HSVd)。
分类地位:啤酒花矮化类病毒属Hostuviroid,马铃薯纺锤形块茎类病毒亚科Pospiviroinae,马铃薯纺锤形块茎类病毒科Pospiviroidae。在国际病毒分类委员会(ICTV)中的编码为80.001.0.02.001。
类病毒异名:Grapevineviroid(Shikataetal.,1984);Cucumberpalefruitviroid(自1965年发现)。
类病毒提纯:冰冻黄瓜病叶,加1.5体积1mol/LK2HPO4,(含1%SDS、0.1%皂土和0.2体积苯酚-氯仿等量混合液)研磨,离心,留水相,加70%乙醇沉淀核酸。用1体积2-甲氧基乙醇2-methoxyethanol、2%十六烷基三甲基溴化铵2%cetyltrimethylammoniumbromide,2mol/L氯化锂和25g/mlDNA酶IDNaseI.处理核酸制剂,核酸加缓冲液(含35%乙醇),注入CF-11纤维素柱,用同样缓冲液过柱,然后,用无乙醇的缓冲液洗脱类病毒,混合几个低分子质量的节分,在不变性条件下经聚丙烯酰胺电泳(7.5、10、12.5或20%凝胶)纯化,切下啤酒花矮化类病毒的特异性带,浸渍、洗脱凝胶,提取类病毒RNA,若有必要,再在变性条件下(7~8mol/L尿素)进一步纯化。每千克黄瓜病叶提纯约得20~40μg啤酒花矮化类病毒(Yoshikawa&Takahashi,1982)。
类病毒理化特性:啤酒花株系是一***价闭锁单链RNA,含297核苷酸(Ohnoetal.,1983),已弄清它的全长核苷酸序列(Ohnoetal.,1983)葡萄株系(4毒株)和黄瓜株系分别由297和303个核苷酸组成,同啤酒花株系的区别是,各有1和16核苷酸的置换(Sanoetal.,1986)。
类病毒株系:啤酒花矮化类病毒的寄主范围和症状,同葡萄类病毒、黄瓜白果类病毒的相似(VanDorst&Peters,1974;Sasaki&Shikata,1977;Sanoetal.,1985),虽然,3种类病毒的核苷酸序列稍有不同,但相同性极高,可达95%~99%(Sanoetal.,1984)。田间,啤酒花株系在啤酒花上,未见有不同症状的分离物。合成的寡核苷酸探针(5′GGTAAGTACCTCCCT3′互补到葡萄株系的51-65残基上),可用斑点杂交试验区别3株系(T.Sanoetal.,1988)。
其他:啤酒花矮化类病毒与其他7种类病毒(鳄梨日斑类病毒、菊矮化类病毒、柑橘裂皮类病毒、椰子死亡类病毒、马铃薯纺锤形块茎类病毒、番茄顶缩类病毒和番茄雄性株类病毒)的差别,包括寄主范围、症状、分子大小、在聚丙烯酰胺凝胶中的电泳迁移率和核苷酸序列。啤酒花矮化类病毒主要侵染啤酒花和一些葫芦科植物(如黄瓜)表现症状,在茄科的一些植物(如番茄)为无症侵染;相反,马铃薯纺锤形块茎类病毒主要在茄科的一些植物(如番茄)产生症状,在一些菊科植物(如土三七属)为无症侵染,而不侵染葫芦科植物。啤酒花矮化类病毒的啤酒花株系和葡萄株系有297核苷酸,而黄瓜株系有303核苷酸,也就是比马铃薯纺锤形块茎类病毒少约40~70核苷酸,啤酒花矮化类病毒与马铃薯纺锤形块茎类病毒核苷酸序列的相同性只有55%(Ohnoetal.,1983)。
在日本啤酒花种植园,啤酒花矮化类病毒的草本寄主范围,限于葫芦科和茄科的植物,没有其他科的寄主(Yaguchi&Takahashi,1984),日本的葡萄和啤酒花栽种地区是相同的,葡萄有80%以上感染葡萄株系(Sanoetal.,1986),因而,推测啤酒花上的类病毒可能来自葡萄。近在日本的香橼、李和桃上发现一种相似的类病毒(Sanoetal.,1986)。啤酒花矮化类病毒和相近的几种类病毒,可能分布全世界。