琼脂糖凝胶电泳原理
不同大小的DNA片段在碱性条件下带负电,在电流的作用下从负极向正极移动。根据不同DNA分子片段的大小和形状,它们在电场中的游动速度不同,所以在相同的时间下,紫外线照射后可以看到DNA的位置,从而达到分离鉴定的目的。
琼脂糖凝胶电泳步骤:1。用蒸馏水清洗制胶工具,准备制胶板,用琼脂封住模具边缘,设置梳子;2.根据待分离样品(DNA)的大小,配制适当浓度的琼脂糖凝胶。准确称取一定量的琼脂糖干粉,加入到适当体积的锥形瓶中,加入一定量的电泳缓冲液(约30ml TAE);放入微波炉加热融化,放凉一会儿(不要烫手就好)。
3.将融化的琼脂溶液摇匀,倒入电泳槽中,等待凝固;4.室温固化约30-40min,小心拔出梳子,取出固化的凝胶放入电泳槽,准备上样;5.将电泳缓冲液(TAE)倒入电泳槽中;通过约1mm的胶面后,去除胶孔内的气泡。
6.上样:在5ulDNA样品中加入1ul上样缓冲液和1ul染料,用抓具混匀后加入凝胶孔中;7.上样完成后,打开电源,红色阳极和黑色阴极,DNA样品从阴极移动到阳极,上样口侧电压为负40-50v,电压约30 min(