金黄色葡萄球菌的详细信息
概论、流行病学、疾病、球菌检查、感染预防、感染治疗、是否存在* * *、传播途径、培养方式、检测方法、材料和方法、实验步骤、结果和分析。金黄色葡萄球菌简介又名“金黄色葡萄球菌”，其细胞壁含有90%的肽聚糖和10%的磷酸胞壁酸。肽聚糖的网状结构比革兰氏阴性菌更致密，结晶紫在染色时附着不会被酒精脱色。反之，阴性菌细胞壁上的肽聚糖层较薄，交联程度差，脂质含量高，所以用酒精洗去紫色复合物，再附着沙黄红。金黄色葡萄球菌与青霉素的发现密切相关。弗莱明发现一些球菌在他的金黄色葡萄球菌培养皿中被杀死了，于是他发现了青霉素。研究还表明，青霉素仅对以金黄色葡萄球菌为代表的革兰氏阳性菌有明显作用。这也是由肽聚糖层的厚度和结构造成的。被称为超级细菌的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的显微图像可以抵抗几乎所有的人类药物，但万古霉素可以对付它。典型的金黄色葡萄球菌呈球形，直径约0.8μm，在显微镜下呈葡萄串状排列。金黄色葡萄球菌没有孢子和鞭毛，大部分没有荚膜，革兰氏染色阳性。金黄色葡萄球菌对营养要求低，在普通培养基上生长良好，好氧或兼性厌氧，最适生长温度37℃，最适生长pH7.4，在干燥环境下可存活数周。平板上菌落厚，有光泽，圆形，直径0.5 ~ 1.0 mm，血平板菌落周围形成透明溶血环。金黄色葡萄球菌具有较高的耐盐性，能在10~15%NaCl肉汤中生长。能分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不产气。甲基红反应阳性，VP反应弱阳性。许多菌株能分解精氨酸、水解尿素、还原硝酸盐和液化明胶。金黄色葡萄球菌耐药性强，对磺胺类、青霉素、红霉素、土霉素、新霉素等抗生素敏感，但由于这些菌株产生青霉素酶等，容易产生耐药性。对碱性染料敏感，1/10万龙胆紫溶液可抑制生长。金黄色葡萄球菌文化在普通培养基中的特点流行病学金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在，可存在于空气、水、灰尘及人畜排泄物中。所以食物被污染的机会很多。美国疾病控制中心报告说，金黄色葡萄球菌引起的感染是第二位的，仅次于大肠杆菌。金黄色葡萄球菌肠毒素是一个世界性的健康问题。金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒占美国细菌性食物中毒总数的33%，在加拿大则更多，占45%。金黄色葡萄球菌引起的食物中毒事件在中国也时有发生。如2006年4月5438+0，12日，无锡市锡山区所辖小学、幼儿园因上课期间饮用袋装奶饮料发生食物中毒事件。金黄色葡萄球菌的流行病学一般有以下特点:季节性分布，多在春夏季；中毒的食物有很多种，如奶、肉、蛋、鱼及其制品。此外，剩菜、煎蛋、糯米糕、凉粉引起的中毒事件也时有报道。上呼吸道感染患者的鼻腔带菌率为83%，因此人和动物的化脓性感染部位往往成为污染源。金黄色葡萄球菌是人类化脓性感染中最常见的病原体，可引起局部化脓性感染、肺炎、伪膜性肠炎、心包炎甚至败血症、败血症等全身性感染。金黄色葡萄球菌的致病性主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶:a .溶血毒素:外毒素，可损伤血小板，破坏溶酶体，引起机体缺血坏死。b .杀死白细胞:能破坏人体白细胞和巨噬细胞。c .血浆凝固酶:当金黄色葡萄球菌侵入人体时，会使血液或血浆中的纤维蛋白沉积在细菌或。葡萄球菌引起的感染容易定位，与这种酶有关。d .脱氧核糖核酸酶:金黄色葡萄球菌生产的脱氧核糖核酸酶耐高温，可作为鉴别金黄色葡萄球菌的依据。E .肠毒素:金黄色葡萄球菌能产生几种引起急性胃肠炎的蛋白肠毒素，分为A、B、C1、C2、C3、D、E、f八个血清型，肠毒素能耐受100℃煮沸30分钟而不被破坏。它食物中毒的症状是呕吐和腹泻。此外，金黄色葡萄球菌还生产表皮素、明胶酶、蛋白酶、脂肪酶、肽酶等。f .表皮剥脱毒素:引起烫伤样皮肤综合征，又称剥脱性皮炎。g .中毒性休克综合征毒素(tsst-1)引起的症状金黄色葡萄球菌肠炎由金黄色葡萄球菌引起，多为原发病长期使用抗生素导致肠道菌群失调所致。抗生素敏感菌株被抑制，耐药金黄色葡萄球菌菌株趁机繁殖。金黄色葡萄球菌是一种侵入性细菌，能够产生毒素，对肠道具有破坏性。因此，金黄色葡萄球菌肠炎起病急，中毒症状严重，主要表现为呕吐、发热和腹泻。呕吐往往发生在发热之前，发热很高。轻度大便次数略多，为黄绿色糊状大便；大便次数严重频繁，一天可达数十次。大便呈深绿色，水样，看起来像海水，所以叫海水样大便。粘液很多，有鱼腥味。有时可排出片状伪膜。假膜放入生理水中，脱落的肠黏膜漂浮在水面上，对诊断很有帮助。小儿体液丢失、脱水、电解质紊乱、酸中毒严重，可出现休克。选取大便涂片粘液部分，显微镜下可见大量脓细胞。如革兰氏染色后，显微镜下可见大量革兰氏阳性球菌。当金黄色葡萄球菌在粪便培养中生长时，可以确诊。一、金黄色葡萄球菌检验样品处理:无菌取25g或25mL食品样品，放入225mL灭菌生理盐水中，匀浆制成10-1稀释液。富集培养:将10-1稀释液接种到7.5%NaCl肉汤或胰蛋白胨肉汤中，37℃培养24小时。分离培养:分别用上述稀释液或培养液划线血平板和Baird-Parker平板，37℃培养24-48小时。金黄色葡萄球菌在血平板上呈金黄色或白色菌落，大而凸，表面光滑，周围有溶血圈。在Baird-Parker平板上，菌落呈圆形，直径2 ~ 3毫米，颜色为灰色或黑色，周围有浑浊带。染色观察:从平板上挑取可疑菌落进行革兰氏染色，金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性。显微镜下呈葡萄状排列，无孢子和荚膜，直径0.5 ~ 65438±0 μm，血浆凝固酶试验:吸取0.5mL兔血浆和0.5mL金黄色葡萄球菌试液浸没肉汤24小时，充分混合，置于36° 65438±0°C，每半小时观察6小时，出现凝固，即小试管倾斜或倒置时，内容物不流动，判定为阳性。同时做一个阴阳对比。耐热核酸酶试验:将肉汤培养物在沸水浴中65438±05min处理24小时，将种子刺在有接种环的甲苯胺蓝-DNA平板上，在36±65438±0℃培养24小时。刺线周围有淡粉色的是阳性。金黄色葡萄球菌在这次测试中呈阳性。其次，金黄色葡萄球菌肠毒素的检测主要有动物试验、血清学试验、免疫荧光试验和酶联免疫吸附试验，这里就不赘述了。预防感染首先，防止食品被金黄色葡萄球菌污染，防止食品被带菌人员污染:对生产加工人员，患有局部化脓性感染(如疥疮、手指化脓等)者，应定期进行健康检查。)和上呼吸道感染(如鼻窦炎、化脓性肺炎和口腔疾病等。)应暂时停止工作或调换岗位。在肉类加工厂，受局部化脓感染的家禽和牲畜尸体的患病部分应切除，并通过高温或其他适当方式处理。其次，防止葡萄球菌肠毒素的形成，食物应低温保存，通风良好，防止肠毒素的形成；在气温较高的春夏季节，食物在阴凉通风处存放时间不宜超过6小时，食用前应彻底加热。第三，金黄色葡萄球菌耐热、耐干燥能力比一般无芽孢菌强，80℃加热30分钟才能杀灭。在表面覆盖一层0.1mg/cm3的超细二氧化钛，在光照下能快速有效地杀灭细菌。在干燥的脓液和痰液中可存活2 ~ 3个月。在10 ~ 15分钟内死于5%石炭酸。对碱性染料敏感，龙胆紫溶液的生长可被1/100000抑制。由于MRSA(耐甲氧西林金黄色葡萄球菌)，青霉素一般不用于感染治疗。因此，金黄色葡萄球菌病毒感染者可用红霉素、青霉素、庆大霉素、万古霉素或头孢菌素VI治疗。治疗事项1，毛囊炎治疗要注意饮食，不吃辛辣食物，不能喝酒。2.不要用手抓患处，以防继发感染。3.症状完全消失后，巩固1个疗程。* * *有卫生部10月24日公布的食品安全国家标准《速冻面米制品》(GB 19295-2011)。在几个速冻品牌食品因为检出金黄色葡萄球菌而下架的背景下，新国标因为具备了允许金黄色葡萄球菌存在的条件而引来诸多讨论。卫生部专家表示，新国标更加科学合理，并没有降低要求。本新国标是卫生部根据《食品安全法》及其实施条例，在执行原《小麦粉、大米制成的速冻及预包装食品卫生标准》(GB 19295-2003)的基础上制定的，将于2011+21正式实施。传播途径一般来说，金黄色葡萄球菌可通过以下途径污染食品:食品加工者、厨师或销售人员携带细菌，造成食品污染；食品本身在加工前带菌，或加工过程中被污染，产生肠毒素，引起食物中毒；熟食产品包装不严，运输过程污染；奶牛患化脓性乳腺炎或家畜局部化脓时对身体其他部位的污染。甘露醇高盐琼脂可用于金黄色葡萄球菌的选择性分离培养，蛋白胨和牛肉粉可提供氮源、维生素和生长因子。d-甘露醇是一种可发酵的糖；氯化钠维持平衡的渗透压；琼脂是培养基的凝固剂；酚红用作pH值指示剂。测试方法材料和方法1，材料
①培养基:7.5%NaCl肉汤培养基和血琼脂平板培养基(按常规方法配制)。
②试剂:7.5%NaCl肉汤培养基，革兰氏染色，血琼脂平板，Baird-Parker琼脂平板，生理盐水，兔血浆(1: 4)。
③设备:培养箱、显微镜、天平、均质机、载玻片、L型涂片棒、三角瓶、刻度移液管、平板、试管和试管架、研磨、1ml注射器、
④实验动物:健康小鼠。
2.方法
待测样品25g+225ml无菌生理盐水。
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直接计数富集培养方法
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贝尔德-帕克琼脂平板7.5%氯化钠肉汤培养基
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血液板。血液板
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涂片染色显微镜观察溶血现象动物接种试验血浆凝固试验
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报告实验步骤1，样品收集
称取25g火腿肠，切碎搅拌均匀(用灭菌研钵研磨)，置于250ml锥形瓶中，加入225ml灭菌生理盐水制成1: 10的样品悬液，混匀作用20min，然后随机取10ml离心。
2、富集分离和培养
①增菌培养法:吸取5ml上清液，接种于7.5%NaCl肉汤培养基中，置于(37±65438±0℃)恒温箱中24h，划线接种于血平板中，于(37±65438±0℃)恒温箱中孵育24h。
②直接计数法:吸取上述悬液，稀释65，438+00倍。根据样品的污染情况，选择65，438+0 ml不同浓度的稀释液，分别加入三个Baird-Parker琼脂平板，每个平板的接种量分别为0.3ml、0.3ml、0.4ml。用灭菌的L形包被棒包被整个平板，在恒温箱(3765438±0℃)中培养24h。之后，分别计数生长在三个周围有浑浊带的平板上的黑色菌落。转移至血平板，在(37 65438±0℃)恒温箱中培养24小时。
3.涂片、染色和显微镜检查
未知细菌的纯培养物涂片，革兰氏染色，显微镜观察。
4.生化实验
①酶接触试验
将1滴3%双氧水滴在载玻片上，取纯化后的细菌放入双氧水中观察变化。30秒内产生大量气泡者为阳性，不产生气泡者为阴性。
②血浆凝固酶试验
吸取1: 4的新鲜兔血浆0.5ml，置于小试管中，加入已培养24小时的2①的肉汤培养液0.5ml，摇匀，置于(37 1℃)培养箱中，每隔0.5h观察一次，观察6h，看有无凝固。试管倾斜或倒置时，出现凝块，即可判定为阳性，以已知的阳性葡萄球菌和阴性肉汤作为对照。
5.动物感染实验
将2①中血琼脂平板上纯化的菌落用无菌生理盐水洗涤后，0.5ml/只小鼠腹腔注射，其他小鼠注射无菌生理盐水作为对照。在相同的条件下观察症状。解剖感染试验中出现症状或死亡的小鼠，收集并分离病料。结果与分析1，培养特征和形态特征
①文化特征
在37℃条件下，需氧和厌氧培养的血液营养琼脂平板上生长出光滑、湿润、鼓胀的金黄色菌落，大小约为65438±0mm，并有β溶血现象。
②显微镜检查结果
显微镜下，细菌为革兰氏阳性球菌，呈葡萄串状排列，有的2、3个球菌相连。根据菌落形态和镜检结果，怀疑该菌株为葡萄球菌。
2、菌落计数报告
将直接计数试验中三个平板中疑似金黄色葡萄球菌的金黄色葡萄球菌菌落数相加，乘以血浆凝固酶试验阳性数，除以5，再乘以稀释倍数，得到每克样品中金黄色葡萄球菌的数量。
3.动物感染试验
注射生理盐水的小鼠没有变化:接种分离细菌的小鼠在9小时内死亡。对死亡小鼠进行解剖，收集病料，进行细菌分离和生化试验，获得原始分离菌。“金黄色葡萄球菌”被列为“非常重要的优质工程”。金黄色葡萄球菌的标准因失踪、三泉、湾仔码头事件而备受争议。在2011，12，1实施的速冻食品新国标中，金黄色葡萄球菌由“不得检出”改为“* * *”，但根据市质监局征求意见后公布的抽检项目，仍拟将金黄色葡萄球菌列为A类检验项目，并标注为速冻米粉食品的“非常重要质量项目”，包括速冻水饺、水饺、包子、花卷、馒头产品中“金黄色葡萄球菌”检出严重不合格。据市质监局介绍，在速冻面制品的抽检中，金黄色葡萄球菌也是A类检验项目。食品检验项目中有一项或多项不符合规定要求的，判定为不合格；当产品有A类不合格项目时，为严重不合格；只有B类项目不合格，一般不合格。同时，三聚氰胺和苏丹红在婴幼儿奶粉和蛋制品中也是同一个A类。为了避免一些肉类和家禽食品中可能含有盐酸克伦特罗，还有一个专门的肉类和家禽罐头食品中盐酸克伦特罗的检测。速冻食品“金黄色葡萄球菌”可检出* * *我国现行的《以小麦粉和大米为主要原料的速冻和预包装食品卫生标准》(GB 19295-2003)规定不得检出金黄色葡萄球菌等致病菌。但卫生部2012年2月21日实施的《速冻面米制品食品安全国家标准》将金黄色葡萄球菌的检测由定性改为定量，规定每批产品中只有1样品才能检出含量为1000至65438+的金黄色葡萄球菌。