如何制备低熔点琼脂糖凝胶?
琼脂糖凝胶的制备
⑴琼脂糖凝胶的制备:称取0.3g琼脂糖,置于三角瓶中,加入30ml TBE或TAE缓冲液,置于三角瓶中,置于三角瓶中,加入30ml TBE或TAE缓冲液,将三角瓶置于微波炉中加热至琼脂糖溶解。向冷却至约65℃的琼脂糖凝胶溶液中加入溴化乙锭,并充分混合。
(2)橡胶板的制备:
①取有机玻璃内罐,洗净晾干;
②将有机玻璃内罐放在水平模具上,装上挡板,放上梳子。吸少量琼脂糖溶液封住膜的边缘,让其凝固,在离底板0.5 ~ 1.0 mm的位置放置一个梳子,这样加琼脂糖后就可以形成一个完美的加样孔。如果梳子离玻璃板比较近,拔出梳子会把孔底弄破,使样品从凝胶和玻璃板之间漏出。
(3)将剩余的温热的琼脂糖溶液倒入胶膜中,使胶液慢慢散开,直至在有机玻璃板的整个表面形成均匀的胶层。凝胶的厚度在3到5毫米之间。检查梳子的齿下或齿间是否有气泡。
(4)在室温下静置约30分钟,待其完全固化后,轻轻拔出梳子,从而在橡胶板上形成间隔开的样品装载孔。配好胶后,将涂满胶的有机玻璃内罐放入含有0.5 ~ 1×TAE(Tris-乙酸)或TBE(Tris-硼酸)工作液的电泳槽中,胶面超过1 mm..
(注:溴化乙锭是一种毒性中等的强诱变剂。使用含有这种染料的溶液时,必须戴手套。使用后应进行净化处理。通常10 mg/ml的储存液是用水配制,室温下避光储存,最终浓度为0.5 μ g/ml。)